关于血清的一些讨论

1、 血清的主要成分和功能

牛血清在细胞培养中对细胞的生长增殖具有重要甚至是难以替代的作用，它含有丰富的细胞生长必须的营养成分。主要有以下成分和功能：

A、 血清中的主要物质—蛋白质如白蛋白等具有缓冲细胞培养液酸碱度、维持渗透压的作用。

B、 转铁蛋白、甲状腺素结合蛋白等结合蛋白，有识别维生素、脂类、金属和其它激素等，并能与有毒金属和热原质结合，从而起到解毒作用。

C、 纤维粘连素、胎牛血清中的胎球蛋白、贴壁因子等能促进细胞贴壁、铺展。

D、 多肽类如血小板促生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子、胰岛素、类胰岛素生长因子、促生长激素等能支持细胞分裂增殖并维持细胞对数生长。

E、 2巨球蛋白等蛋白酶抑制剂能抑制蛋白酶，保护细胞不受损害。

F、 血清中还含有丰富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及与蛋白相结合状态的微量元素等，对细胞培养均有意义。

正因为血清具有如此复杂的成分和重要的功能，所以血清的保存和使用显得非常重要。

2、 保存血清的最好方法：

我们建议血清应保存在-15℃至-20℃，有效期为5年，若存放于4℃时，请勿超过四周，若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。不宜反复冻融。配制成完全培养基后应在四周内用完。

3、 血清解冻后有絮状沉淀物出现，该如何处理：

血清中沉淀物的出现有许多种原因，最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后也会存在于血清中，也是造成沉淀物的主要原因之一，但这些絮状沉淀物并不影响血清本身的质量，若您欲除去这些沉淀，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以直接过滤的方式去除这些沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

4、 如何解冻血清才不会使血清质量受损：

我们建议您将血清从冷藏箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融，但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

5、 为什么要热灭活血清：

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐您使用热灭活血清。

6、 有必要做热灭活吗：

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数细胞而言是不需要的，经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热灭活处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，类似于“小黑点”形状，这常常会让研究者误认为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热灭活处理，如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量！

7、 如何避免沉淀物的产生：

我们建议您在使用血清的时候，注意下列操作：

A、 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-20℃至4℃至室温），若血清解冻时改变的温度太大（如-20℃至37℃），实验显示非常容易产生沉淀物。

B、 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

C、 请勿将血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，从而影响血清质量。